人胆固醇酯水解酶基因慢病毒载体构建及鉴定

摘要: 目的构建含有人胆固醇酯水解酶 (hCEH) 基因的慢病毒表达载体pLenti6.3-hCEH-IRES-EGFP, 为hCEH基因治疗缺血性脑卒奠定基础。方法应用聚合酶链反应方法扩增目的片段, 在目的基因进行上、下游分别加上Pac I和Asc I两个酶切位点, 经双酶切后, 转化入感受态DH5α细胞中, 通过筛选获得重组质粒。将目的基因片段和pLenti6.3-IRES-EGFP载体连接, 获得慢病毒表达载体pLenti6.3-hCEH-IRES-EGFP, 并进行测序。抽提慢病毒载体, 转染293T细胞, 包装病毒, 测定病毒滴度。结果目的基因与慢病毒表达载体pLenti6.3-IRES-EGFP连接, 慢病毒表达载体pLenti6.3-hCEH-IRES-EGFP构建与预期相匹配, 包装细胞293T呈绿色荧光。结论成功构建了携带hCEH基因的慢病毒载体。